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流式细胞仪检测细胞周期的步骤

2010-05-19 14:17:25 易生物仪器 浏览次数:0 网友评论 0

流式细胞仪检测细胞周期的步骤
应用: 通过流式细胞仪分析各时期的细胞百分数,可检测细胞的增殖、凋亡。

原理: 通常用PI染细胞核,PI在一定波长的光下发出荧光,其强度与DNA含量成正比。绿色荧光蛋白、红色荧光蛋白及其它发光基团也可作为标记物,分选细胞。

方法:

1)将细胞以1×106接种于60mm培养板,80%汇合后转染。

2)24小时后在新鲜培养液中加入适当的抗生素真核表达载体上的抗性标记)进行培养(该步可选)。

3)48-72小时后用胰酶消化收集细胞,PBS洗两遍,弃上清,加入1ml 70%预冷乙醇中,吹打均匀,4℃固定12小时以上。

4)PBS洗涤去乙醇,1000rpm, 5min,洗两遍。

5)0.5mlPBS重悬细胞,加入PI和 RNaseA至终浓度50µg/ml,37℃ 温浴30 min。

6)用流式细胞仪测定周期。

PI:碘化丙啶,以PBS配成1mg/ml,4℃保存。
RNaseA:10mg/ml
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